斑马鱼血栓模型在中药活性成分筛选中的适用性

为了考察斑马鱼血栓生成模型在中药成分活性筛选中的适应性,利用体外血小板聚集实验和体内斑马鱼血栓形成实验,分别检测中药单体对血小板聚集和血栓形成的影响。筛选模型选择3~5 d的野生型AB系斑马鱼以及转基因TG系（integrin αIIb: EGFP）血小板标记绿色荧光斑马鱼,利用三氯化铁诱导血栓形成,以凝血时间为指标,用20种中药单体成分处理斑马鱼,考察对斑马鱼血栓形成的影响。同时,采集大鼠全血制备富血小板血浆和贫血小板血浆,利用血小板聚集仪测定血小板聚集率,检测中药单体成分活性。结果显示：有7种中药单体成分具有抑制斑马鱼血栓形成活性,首次发现桃叶珊瑚苷具有明显的抑制斑马鱼血栓形成作用;体外血小板聚集实验结果显示有12种中药材成分具有抑制血小板聚集的作用,其中100 μg/mL 红景天苷的血小板聚集抑制率88.22%;利用斑马鱼血栓模型检测出的7种中药单体与体外血小板聚集实验结果一致。斑马鱼血栓生成模型对中药抗血栓活性筛选具有良好的适应性。     

低聚果糖和低聚异麦芽糖促进斑马鱼肠道蠕动作用的研究

探讨基于斑马鱼模型的低聚果糖及低聚异麦芽糖对肠道蠕动的促进作用。选用发育正常的5 d的斑马鱼幼鱼,各实验组分别加入不同浓度的低聚果糖和低聚异麦芽糖溶液,培养24 h后,在显微镜下观察其对斑马鱼肠道蠕动次数的影响。实验结果表明,125~500 mg/mL的低聚果糖和低聚异麦芽糖均对斑马鱼肠道蠕动有促进作用,蠕动次数与浓度成正相关性。相同浓度条件下,低聚果糖较低聚异麦芽糖促进斑马鱼肠道蠕动的作用更明显。采用斑马鱼动物模型可实现促进肠蠕动药物的早期、快速筛选。     

利用斑马鱼模型评价氨基葡萄糖盐酸盐及淫羊藿的促进骨骼矿化作用

探讨基于斑马鱼模型的不同浓度的氨基葡萄糖盐酸盐及淫羊藿提取物的促进骨骼矿化活性。选用发育正常的72 hpf斑马鱼胚胎,以培养水为溶剂对照,各受试组分别加入不同浓度（1、10和100 μg/mL）的氨基葡萄糖盐酸盐溶液或淫羊藿提取物溶液,连续培养4 d后,用体积分数为0.2 %钙黄绿素染色1 h,在体式荧光显微镜下观察斑马鱼骨骼发育情况,拍照并用图像分析软件计算骨骼染色面积。与对照组相比,各受试组对斑马鱼骨骼矿化均呈现一定程度的促进作用,且呈现明显的剂量依赖性。氨基葡萄糖盐酸及淫羊藿提取物均具有较好的促进斑马鱼骨骼矿化的活性。相同浓度条件下,氨基葡萄糖盐酸盐较淫羊藿提取物具有更好的促进骨骼矿化活性。     

中国七叶树悬浮培养体细胞球形胚的增殖与发育研究

以中国七叶树(Aesculus chinensis Bunge)的胚性愈伤组织为材料,进行悬浮培养诱导体胚增殖和发育研究。在MS+2,4D(3 mg/L)+NAA(1 mg/L)+KNO3(1.9 mg/L)+蔗糖(30 g/L)的液体培养基中可获得同步化程度较高的球形胚;采用MS+2,4D(2 mg/L)+KT(0.2 mg/L)+蔗糖(40 g/L)和MS+2,4D(3 mg/L)+BA(0.5 mg/L)+蔗糖(40 g/L),两种培养基均可使体细胞胚保持在球形胚阶段;而MS+TDZ(0.02 mg/L)+蔗糖(30 g/L)可有效解除对球形胚发育的阻遏,促使子叶胚的形成;建立了球形胚增殖和分化的两个悬浮培养体系,同时跟踪观测了液体培养基的pH变化,球形胚增殖方式和球形胚启动和发育动态,以及悬浮培养过程中体胚的形态结构变化。     

梅花鹿茸提取物及TGF—β1对山羊切割后胚胎修复和发育的影响

为了修复切割后的山羊胚胎,本研究将梅花鹿茸提取物和转化生长因子（TGF—β1）分别以不同的浓度添加到含10％FBS的PBS基础培养液中．对桑椹期胚胎进行切割后,在5％CO2,95％空气,38．5℃,湿度100％的培养箱中进行培养1-3天．结果表明,相对于转化生长因子而言,鹿茸提取物对切割后的胚胎具有更好的修复作用,并能提高切割胚的囊胚期发育率．     

27种中药提取物抑制血管生成活性的评价

对27种中药分别采用石油醚、乙酸乙酯、水进行系统提取,利用转基因斑马鱼对提取物进行血管生成抑制活性检测。提取物处理斑马鱼胚胎24 h后,统计斑马鱼节间血管(ISV)的生长情况,并计算抑制率;部分有活性的提取物进一步采用鸡胚尿囊膜（CAM）实验进行验证。实验结果显示,川芎水提物、白芍乙酸乙酯提取物、竹黄水提物、鬼箭羽乙酸乙酯提取物和水提物、乳香水提取物、大青叶乙酸乙酯提取物显示出抑制血管活性现象;其中川芎水提取物、鬼箭羽乙酸乙酯和水提物、乳香水提取物对鸡胚尿囊膜血管生成具有明显的抑制作用。从27种中药中发现了7种提取物具有抑制转基因斑马鱼节间血管生长的作用,这种作用与血管内建生长因子受体2(VEGFR2)表达有关。     

悬浮物对斑马鱼胚胎发育的影响

为探究水中悬浮物含量对斑马鱼(Danio rerio)胚胎发育的影响，挑选发育正常的斑马鱼胚胎分为CK组、T1组、T2组和T3组，分别在悬浮物质量浓度为0、10、100和1 000 mg·L -1的水体中培养168 h，每12 h记录胚胎孵化率和胚胎或仔鱼的死亡率，在实验进行72 h后统计仔鱼心率，在实验进行168 h后统计仔鱼畸形率，并于实验进行4、12、24和48 h后拍照观察胚胎的发育情况。结果显示：1) 与CK组相比，T1组、T2组和T3组斑马鱼胚胎的累计孵化率在实验进行60 h后有统计学意义上的下降(p<0.05)，且T3组的该项指标在实验进行72 h后直至实验结束均有统计学意义上的下降(p<0.05)；2) 在实验进行120 h后直至实验结束，T3组与CK组相比仔鱼的累计死亡率均有统计学意义上的上升(p<0.05)；3) 在实验进行72 h后，T1组、T2组和T3组与CK组相比仔鱼心率有统计学意义上的下降(p<0.05)；4) T3组与CK组相比仔鱼畸形率有统计学意义上的上升(p<0.05)；5) 与CK组相比，T1组、T2组和T3组的胚胎发育较为迟缓。研究结果提示水体中悬浮物质量浓度过高可导致斑马鱼胚胎发育迟缓、胚胎孵化率和仔鱼心率下降、仔鱼的死亡率和畸形率上升。